青島肝素親和層析介質(zhì)操作步驟
1.平衡：用5~10CV的平衡緩沖液（20-50mM PB或Tris/HCl，pH 7.4-8.0，可加入0.15M NaCl抑制非特異吸附）平衡層析柱，至流出液電導(dǎo)和pH不變（與平衡液一致）。
2.進(jìn)料：樣品緩沖液應(yīng)盡可能與平衡液一致。固體樣品可用平衡液溶解配制；低濃度樣品溶液可用平衡液透析；高濃度樣品溶液可用平衡液稀釋。為了避免堵塞層析柱，樣品應(yīng)經(jīng)離心或微濾處理。進(jìn)料量根據(jù)介質(zhì)的載量和料液中目標(biāo)蛋白的含量計(jì)算。
3.淋洗：上樣完畢后繼續(xù)用平衡緩沖液淋洗至基線。
4.洗脫：用洗脫緩沖液（20-50mM PB或Tris/HCl+1-2M NaCl，pH7.4-8.0，NaCl濃度需要根據(jù)目標(biāo)蛋白的結(jié)合力進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整）洗脫，收集流出液。可采用線性梯度或階越式梯度洗脫。
5.原位清洗：為了避免不同樣品間的相互干擾，或者當(dāng)介質(zhì)污染比較嚴(yán)重時(shí)（反壓增加），需要對(duì)介質(zhì)進(jìn)行在位清洗。
（1）對(duì)于以離子鍵結(jié)合的蛋白，可用2~3 CV以上的2M NaCl清洗，并用3 CV以上的純水沖洗。 （2）對(duì)沉淀或變性蛋白蛋白，可用0.1M NaOH清洗（1~2h），并用3~10 CV平衡液和3 CV以上的純水沖洗。也可用6M Gua-HCl或8M Urea清洗（0.5~1h） （3）對(duì)疏水性結(jié)合的蛋白，可用0.1~0.5%的非離子去污劑清洗（1~2h），并用3~10 CV的純水沖洗。
其它注意事項(xiàng)：在裝柱、使用和保存柱子的時(shí)候，要避免柱子流干，氣泡進(jìn)入。
