離子對色譜行為的影響

采用增加離子強度的方法洗脫蛋白質時，通常選用某種非緩沖鹽類，zui常用的是NaCl，添加到起始緩沖液中，構成了洗脫緩沖液。在進行色譜分離時，洗脫緩沖液中的緩沖物質固然會影響到色譜效果，實際上非緩沖鹽的種類和性質同樣會影響到色譜時的分辨率和選擇性，使用不同的非緩沖鹽離子時，可能造成不同物質被洗脫的先后順序發生變化，因此非緩沖鹽的選擇同樣具有重要意義。

在前面離子交換理論部分討論過，價態高的離子與交換劑的結合力更強，所以一般情況下，多價離子是比一價離子更好的置換離子，它們能使蛋白質比較早被洗脫下來 （保留值小）。所以在陽離子交換劑上，蛋白質的保留值與置換離子的關系為：Ba2+＜Ca2+＜Mg2+＜NH4+＜K+＜Na+＜Li+，但也存在例外，比如對于溶菌酶來說，NH4+是比Mg2+更有效的置換離子。在選擇置換離子時，應當考慮到多方面的因素，強的置換離子能有效縮短色譜時間，但往往也降低蛋白質回收率。一般情況下選擇置換能力居中的鹽離子較為合適，在洗脫與交換劑牢固結合的蛋白質時，選用強的置換離子具有優勢。

不但置換離子，洗脫鹽中與功能基團帶同種電荷而不參與離子交換過程的離子也會影響到蛋白質的色譜行為，原因也有多種。有些是因為離子與蛋白質發生作用導致的。此外，二價離子如Ca2+和Mg2+能與蛋白質分子中的酰胺基形成復合物而影響到其色譜行為。

總之，離子對色譜行為的影響是多方面的，沒有一定的規律。在首ci進行色譜分離時，可優先選擇比較通用的一些緩沖物質和鹽類，在此基礎上再進一步優化。